蓝白斑筛选步骤与原理，蓝白斑实验失败的原因

蓝白斑筛选是重组子筛选的1种方法，是在抗生素筛选基础上的第2次筛选，是根据载体的遗传特征筛选重组子。在这种方法中，片段被克隆进多克隆位点内（MCS），而MCS区位于基因lacΖα内部，也就是说成功克隆的载体，其lacΖα基因是破坏了的。本文介绍蓝白斑筛选步骤与原理、及分析实验失败原因。

蓝白斑筛选实验原理

蓝白斑筛选是一种快速有效的重组细菌鉴定技术，依赖于β-半乳糖苷酶的活性。β-半乳糖苷酶是一种在大肠杆菌中出现的酶，将乳糖切割成葡萄糖和半乳糖。

为了筛选含有重组DNA的克隆，将X-gal生色底物加入到琼脂板中。如果产生β-半乳糖苷酶，则X-gal水解形成5-溴-4-氯-吲哚氧基，其自发二聚化而产生称为5,5'-二溴-4,4'-二氯-靛蓝的不溶性蓝色色素。由非重组细胞形成的菌落因此呈现蓝色，而重组细胞的菌落呈现白色。从而可以容易地挑选和培养所需的重组菌落。

异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）与X-gal一起用于蓝白斑筛选。IPTG是一种不可代谢的半乳糖类似物，可诱导lacZ基因的表达。应该注意的是，IPTG不是β-半乳糖苷酶的底物，而只是诱导物。为了视觉筛选目的，需要像X-gal那样的生色底物。