荧光原位杂交技术原理及应用

原位杂交(in situ hybridization,ISH）指将目标DNA或RNA序列通过放射性或非放射性物标记后与染色体DNA进行杂交检测目标序列在染色体上的位置与分布特征的技术。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)指用荧光标记物代替放射性同位素标记探针而进行的原位杂交。本文概述荧光原位杂交技术原理、标记物的选择、技术要点、发展及应用。

一、荧光原位杂交技术原理

荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种重要的非放射性原位杂交技术。其基本原理是如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性—退火—复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。与其他杂交技术进行综合比较发现，荧光原位杂交技术（FISH）具有一些优势：循环周期短，稳定性高，非常安全；分辨率高，为3～20 Mb；探针能较长时间保存；多色标记，简单直观；在荧光显微镜下在同一切片上同时观察几种DNA探针的定位，直接得到其相对序列和位置，从而大大加速生物基因组和功能基因组定位的研究。